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ATP含量檢測試劑盒 微量法

ATP 含量檢測試劑盒說明書(shu)
微量(liang)法

產(chan)地(di)：北京市通州(zhou)區馬駒橋(qiao)聯(lian)東U谷8三樓
英文名稱:ATP content detection kit
產品商標：solarbio
注意：正式測定(ding)前(qian)務必取2-3 個預期差異較大(da)的樣(yang)本做預測定。
貨號：BC0305
規格：100T/96S
保存與運(yun)輸：4℃保(bao)存或-20℃保(bao)存；      ;      ;
參(can)考(kao)價(jia)格(ge)：1560
庫存狀態：現貨
關鍵詞：ATP含量檢測|ATP含量|ATP|

產品(pin)內容：
提取液(ye)：液(ye)體(ti)100mL×1 瓶，4℃保存(cun)；
試劑一：液體20mL×1 瓶(ping)，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶(ping)，4℃保存。臨(lin)用前加(jia)入(ru)3.5mL 蒸餾水充分溶解(jie)(jie)，可加(jia)熱促進溶解(jie)(jie)；
試劑三：液(ye)體4mL×1 瓶，4℃保(bao)存；
試劑(ji)四：粉劑(ji)×1 支，-20℃保存。臨用前每(mei)支加入0.4mL 蒸(zheng)餾水溶(rong)解，可分裝后-20℃保存，避免反復凍(dong)融；
試劑五：粉劑×1 瓶(ping)，4℃保存。臨用前加入(ru)1mL 蒸(zheng)餾(liu)水；
試劑(ji)六(liu)：粉劑(ji)×1 支，-20℃保存。臨用前加入(ru)0.5mL 蒸餾水(shui)備用，可(ke)分裝后-20℃保存，避(bi)免(mian)反復凍融；
標準(zhun)品：粉劑×1 支，-20℃保存(cun)。5mg ATP，臨用前加入0.826mL 蒸餾水配成10μmol/mL 的ATP標(biao)準溶液。

產品(pin)說明：
ATP 廣(guang)泛存(cun)在于動物(wu)(wu)、植物(wu)(wu)、微生物(wu)(wu)和培(pei)養(yang)細胞中，是生物(wu)(wu)能(neng)量(liang)通貨，能(neng)荷(he)是描(miao)述細胞能(neng)量(liang)代(dai)(dai)謝狀(zhuang)態的主要(yao)參數。測定(ding)ATP 含量(liang)并(bing)且計算能(neng)荷(he)，能(neng)夠反映能(neng)量(liang)代(dai)(dai)謝狀(zhuang)態。
HK 催(cui)化(hua)葡(pu)萄糖(tang)(tang)和(he)ATP 合(he)成(cheng)6-磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)(tang)，6-磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)(tang)脫氫酶進一步催(cui)化(hua)6-磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)(tang)脫氫生成(cheng)NADPH，NADPH 在340nm 有特征吸收峰，NADPH 和(he)ATP 含量成(cheng)正(zheng)比，以(yi)此反應ATP 含量。

自備(bei)儀器和用品：
紫外分光光度(du)計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液槍、微量(liang)石(shi)英比色皿(min)/ 96 孔UV 板、研缽/勻漿器、蒸餾水和lv仿。

操(cao)作步驟：
一、ATP 的提取：
1、血(xue)清（漿(jiang)）中ATP 的(de)提取(qu)：按照血(xue)清（漿(jiang)）體(ti)積（mL）：提取(qu)液(ye)體(ti)積（mL）為1：5~10 的(de)比例（建議取(qu)約(yue)0.1mL 血(xue)清（漿(jiang)），加入1mL 提取(qu)液(ye)），充分震蕩，10000g，4℃離心10min；取(qu)上清液(ye)另一EP 管(guan)中，加入500μL 的(de)lv仿充分震蕩混勻，10000g 4℃離心3min，取上(shang)(shang)清，置(zhi)冰上(shang)(shang)待(dai)測（不(bu)可用于蛋(dan)白質含(han)量測定(ding)）。

2、組(zu)織(zhi)中ATP 的提(ti)(ti)取：按照組(zu)織(zhi)質量（g）：提(ti)(ti)取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g組(zu)織(zhi)，加(jia)入(ru)1mL 提(ti)(ti)取液），進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清(qing)另一(yi)EP 管(guan)中，加(jia)入(ru)500μL 的lv仿充分震蕩(dang)混勻，10000g 4℃離心(xin)3min，取上清，置冰上待測（不可用于蛋白質含量(liang)測定）。
3、細(xi)胞或(huo)細(xi)菌中ATP 的提取：先收集細(xi)胞或(huo)細(xi)菌到離心(xin)管內，棄上(shang)清，按(an)照(zhao)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞數量（104個）：提取液體積(ji)（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬(wan)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞加入(ru)1mL 提取液），超(chao)聲(sheng)波破碎1min（冰浴，強(qiang)度20％或(huo)200W，超(chao)聲(sheng)2s，停1s），10000g 4 ℃離心(xin)10min；取上(shang)清液另一EP 管中，加入(ru)500μL 的lv仿充(chong)分震蕩混勻，10000g 4℃離(li)心3min，取上清，置冰上待測（不可用于蛋白(bai)質含量測定）。

二、測(ce)定步驟：
1、紫外分光光度計(ji)/酶(mei)標儀預熱30 min 以上，調節波長到340nm，蒸餾水調零。
2、將10μmol/mL 的(de)ATP 標準溶液用蒸餾水(shui)稀釋16 倍即0.625 μmol/mL 標準溶液備用。
3、工作(zuo)液的配制(zhi)：臨用前請按試劑(ji)二(er)(mL)：試劑(ji)三(mL)：試劑(ji)四(mL)：試劑(ji)五（mL）：試劑(ji)六(mL)=1：1：0.1：0.4：0.1 的比例配制(zhi)，現配現用。
4、加樣表(biao)
在微量石英比(bi)色皿或(huo)96 孔(kong)UV 板中加入：
試(shi)劑名(ming)稱(μL)      ;    測定管          標準管
樣本                   20
標準液                                 20
試劑一(yi)                128             128
工作液                 ;52              52

充分(fen)混合后，立即測(ce)定340nm 下10s 的(de)吸(xi)光(guang)值(zhi)A1，然(ran)后將比色(se)皿連同(tong)反(fan)應液一起放入(ru)37℃（哺乳動物(wu)）或(huo)25℃（其他物(wu)種）水浴(yu)中(zhong)反(fan)應3min，拿出擦拭干凈立即測(ce)定(ding)其在3min10s 時的(de)吸(xi)光(guang)值(zhi)A2。用96 孔(kong)板則(ze)放入(ru)37℃（哺乳動物(wu)）或(huo)25℃（其他物(wu)種）培養箱中(zhong)（酶標儀(yi)若自帶控溫功(gong)能，則(ze)將溫度調37℃或(huo)25℃）。分別計算ΔA 測(ce)定(ding)=A2 測(ce)定(ding)管(guan)-A1 測(ce)定(ding)管(guan)，ΔA 標準(zhun)=A2標準管-A1 標準管

三、ATP 含量計算：
1、血清（漿）中(zhong)ATP 含(han)量計算
ATP 含量(liang)(μmol/mL) =ΔA 測定÷（ΔA 標準(zhun)(zhun)÷C 標準(zhun)(zhun)）×（V 提取+V 血清(qing)(qing)（漿(jiang)））÷V 血清(qing)(qing)（漿(jiang)）=6.875×ΔA 測定÷ΔA 標準(zhun)(zhun)
2、組(zu)織、細菌或(huo)細胞中ATP 含量(liang)計算
（1） 按樣本鮮重計算
ATP 含量（μmol/g 鮮(xian)重）= ΔA 測(ce)定(ding)÷（ΔA 標準÷C 標準）×V 提取÷W=0.625×ΔA 測(ce)定(ding)÷ΔA 標準÷W
（2） 按(an)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)密度(du)計(ji)算(suan)
ATP 含量(μmol/106 cell）=ΔA 測定÷（ΔA 標(biao)準(zhun)÷C 標(biao)準(zhun)）×V 提取÷5=0.125×ΔA 測定÷ΔA 標(biao)準(zhun)

C 標準(zhun)(zhun)管：標準(zhun)(zhun)液濃度，0.625μmol/mL；
V 提取：加入的提取液體積，1mL；
V 血清（血漿）：血清（漿）體積，0.1mL；
W：樣本質量，g；
5：細胞或(huo)細菌總數，5×106 個。

注(zhu)意事(shi)項(xiang)
1、加(jia)入提取液離心后的上清若為渾濁為正(zheng)常現象。
2、提取(qu)過(guo)程(cheng)嚴格在(zai)冰浴條件(jian)下進行。
3、用微量(liang)石英比色(se)皿測(ce)量(liang)的吸光值(zhi)(zhi)大于(yu)1.4 或者ΔA 測(ce)定(ding)大于(yu)1.2 時（石英96 孔(kong)板的吸光值(zhi)(zhi)大于(yu)1.4 或者ΔA 測(ce)定(ding)大于(yu)1.2 時），可以將樣(yang)品(pin)稀釋(shi)后進行測(ce)定(ding)。若吸光值(zhi)(zhi)小于(yu)0.01，則可以增加(jia)(jia)反應時間（5min 或10min）來測(ce)定(ding)，標準(zhun)品(pin)需要增加(jia)(jia)同樣(yang)的反應時間。

相關(guan)文獻：

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death & Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
《RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury》 作者:Yang Wang，Jianhang Jiao，Shanyong Zhang，Changjun Zheng，Minfei Wu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影響因子:3.743 PMID:31146112
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影響因子: PMID:30453281
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448

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